圖 1. 濃度與響應的關系示意圖

其中，A 是峰面積，b 是分析物校準曲線的斜率，有時也稱為靈敏度。不同化合物的校準曲線斜率 b 值可能不同。因此，通常需要為每種必須定量的分析物生成校準曲線。

為了生成校準曲線，可以使用分析物的純化合物作為校準標準品（以下簡稱校準品），制成不同濃度的溶液。校準品與樣品無關，在這種情況下，校準品可視為外部校準標準品（外部校準標準品與樣品在不同的批次中進行分析，而內部校準標準品與樣品一起添加和分析）。

在許多實際應用中，最好是在不含分析物的空白樣品中加入不同含量的校準化合物來進行校準（即含基質的標準品）。這種方法可以使含有校準標準的樣品的分析盡可能接近真實樣品的分析，并可以在分析中減去基質的整體影響。對于結構相似的化合物，有時只使用其中一種化合物的校準曲線，并根據(jù)相同的校準品對不同的化合物進行定量。但不建議使用這種方法，只有在無法獲得所有化合物的校準標準品時才可使用。

有些線性定標不通過原點，因此必須使用以下形式的關系來計算峰面積：

大多數(shù) HPLC 檢測器的峰面積與樣品濃度呈線性關系。但有時也會遇到非線性關系。非線性可能是由于檢測器過載造成的，而檢測器本來應該具有線性響應。此外，極低濃度的分析物也可能導致非線性響應。因此，必須對整個濃度范圍進行線性驗證，尤其要注意極低濃度和極高濃度。熒光檢測的線性范圍僅對低濃度有效。熒光和化學發(fā)光檢測器有時需要使用非線性校準曲線。這樣仍然可以直接根據(jù)非線性校準曲線或使用相應的關系式計算濃度。不過，在一般情況下，線性校準曲線更為可取。

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在許多定量技術中，每次色譜分析都會引入內標物（以下簡稱內標）。內標是實際樣品中不存在的化合物，在分析過程中，在選定的時間點加入一定量的內標，用于驗證重現(xiàn)性、計算樣品損失等。內標的選擇必須使其在分析過程中的表現(xiàn)與分析物盡可能接近，不干擾分析物的測定，并提供一個便于積分的色譜峰等。

除了在樣品中加入內標（如通過樣品制備過程）外，有時在處理過的樣品中加入色譜標準品也很有用。這種標準品是一種內標，僅用于驗證色譜過程是否正常；它存在于色譜儀的處理過的樣品中。