如下圖案例中，使用廣州研創(chuàng)EnantioPak^?Y1手性色譜柱對樣品進(jìn)行拆分過程中，通過優(yōu)化流動相有效解決了峰重疊的問題，使每個峰都能達(dá)到良好的分離。

色 譜 柱：EnantioPak^?Y1（250*4.6mm，5μm）

柱溫：25℃

進(jìn) 樣 量：10μL

流速：1.0mL/min

檢測波長：210nm

流動相：正己烷（0.1%TFA）：乙醇=80:20 

                   優(yōu)化前的圖譜                   

調(diào)整流動相比例：正己烷（0.1%TFA）：乙醇=88:12 

       優(yōu)化后的圖譜：   

通過調(diào)整增大流動相正己烷和減小乙醇的比例峰型得到了有效改善。

調(diào)整流速：流速過快或過慢都可能影響色譜峰形，例如手性色譜柱的典型流速在1.0 mL/min。通過調(diào)整流速，可以嘗試降低流速增加樣品在色譜柱中的停留時間，從而提高分離度，找到最佳的分離條件，避免峰重疊。

調(diào)整柱溫和進(jìn)樣量：適當(dāng)提高柱溫或降低進(jìn)樣量，有助于改善分離效果。

純化樣品：通過適當(dāng)?shù)募兓椒ㄈコ龢悠分械碾s質(zhì)，如常見的萃取法、洗滌法、固相萃取法、離子交換法、膜過濾法等，以減少峰重疊的可能性。

選擇合適的溶劑：用與流動相相溶的溶劑溶解樣品，如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉淀，不但影響了純化分離，且會使柱子惡化，常見溶劑互溶表見下圖。

在進(jìn)行HPLC分析時，注意操作細(xì)節(jié)，如進(jìn)樣方式：手動進(jìn)樣時速度必須快，一般應(yīng)在1s之內(nèi)。進(jìn)樣時間過長，會造成峰展寬、前伸或拖尾變形。進(jìn)樣量一般液體0.1-5μL，進(jìn)樣太多，會使色譜峰展寬，造成前伸、拖尾或重疊而分離不好。

如果是使用自動進(jìn)樣器，需檢查進(jìn)樣系統(tǒng)是否存在氣泡、樣品瓶是否裝得過滿、是否存在進(jìn)樣針座堵塞或漏液等。

還需注意色譜柱的安裝和連接、如安裝前檢查好色譜柱的流向、流動相的配制和更換等，以確保分析的準(zhǔn)確性和可靠性。

如果色譜柱性能下降嚴(yán)重，無法通過以上方法改善分離效果，可以考慮更換新的色譜柱。選擇性能更好、更適合樣品性質(zhì)的色譜柱，有助于改善分離效果。