隨著HPLC的普及，分析方法學(xué)的開發(fā)成為一個合格的分析研究員的標(biāo)配，而色譜柱的篩選是分析方法開發(fā)的第一步，也是最重要的一步，優(yōu)秀的分析研究員可以根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特征很快確立所需的色譜柱，然后根據(jù)化合物的Pka，logP確立流動相。那影響色譜柱性能的物理參數(shù)有哪些？

　　(1)硅膠純度

　　硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質(zhì)會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。

　　(2)色譜柱尺寸

　　填料床的長度和內(nèi)徑，增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導(dǎo)致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約溶劑，可減少橫向擴散，但壓力較大，對系統(tǒng)要求較高。

　　(3)顆粒形狀及粒徑

　　球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻，不規(guī)則形柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低，壓力越大。

　　(4)顆粒表面積

　　顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，以m2/g表示，相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力，更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。

　　(5)孔徑

　　顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍是80~300?，大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時間，改善分離，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。